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北京流式细胞转染系统

来源:未知 编辑:admin 发布时间:2018-07-19

  MaxCyte公司为您提供MaxCyte STX ®和 MaxCyte VLX ®两套北京流式细胞转染系统,能够以静态转染或者具有独家专利技术的流式电穿孔技术帮您实现高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,转染通量高达5E5 to 2E11个细胞,广泛应用于DNA, RNA, 小分子等转染材料在原代细胞、细胞系、干细胞、昆虫细胞等不同细胞的转染实验中,系统操作简单、实验结果重复性高,并且符合现行药品生产管理规范(cGMP)标准,通过了国际标准化组织(ISO)认证,欧洲安全(CE)认证。

北京流式细胞转染系统

  1. 流式细胞转染系统以 5X105个/ml 的浓度在 75 cm2 培养瓶中接种 L8057-Y10 细胞(F12/FB 培养基)流式电穿孔转染系统(含谷氨酰胺(2 mmol/L ),青霉素(50 U/ml ) 及链霉素(5 μg/ml ) 的 Ham’s F12 , 添加 10% FBS (热灭活;GIBCO #16140-014)),并于 37°C,5% CO2 孵箱培养细胞。

  2. 在对数生长后期,收集细胞,4°C ,380 g 离心 5 min。

  3. 用 10ml D-PBSA 洗涤细胞沉淀,4°C,380 g 离心 5 min。

  4. 用 5 ml 电穿孔缓冲液洗涤细胞沉淀,用血细胞计数仪计数细胞。

  5. 4°C,380 g 再次离心 5 min,收集细胞。

  Maxcyte系统基础技术原理是电穿孔,流式细胞转染系统传统的电转细胞死亡率高,流式电穿孔转染系统每种细胞的电转的条件都需要优化,而Maxcyte公司利用其专利技术的流式电穿孔技术,细胞流入一个电击腔室中进行电转染,系统已优化电场强度、电脉冲时间和次数等多个参数,系统预存多个细胞系的转染方法,来满足高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,是完整解决方方案的技术平台。

  1. 将轰击后的细胞移至盛有 10 ml F12/FB 的离心管中,另取少许培养基冲洗电穿孔杯,移回到离心管,离心,收集细胞。

  2. 将细胞于 20 m l F12/FB 中再次悬浮,种到 75 cm2 培养瓶中,于37°C ,5 %CO2 培养箱中孵育,令新霉素抗性基因表达。

  3. 24~48 h 后,离心收集细胞,然后用 20 ml 选择性培养基中再次悬浮细胞。

  4. 随后,需每 2~4 天换液(选择性培养基),以清除死亡细胞的碎片,流式电穿孔转染系统并且使抗性细胞生长,筛选过程至少需要两周。

  MaxCyte STX Features

  Simple:Pre-loaded with cell-type specific optimized protocols; plug and play transfection

  Broad Range:Cell lines, primary cells, stem cells

  Loading Agents:DNA, RNA, siRNA, proteins, small molecules

  High Yield:>90% viability & recovery for many cell types

  High Efficiency:>90% cell loading & transfection efficiency for many cell types

  Scalable:5E5 cells to 4E7 using small-scale; up to 1E10 cells using large-scale flow electroporation

  Rapid:5E5 cells in seconds; 1E10 cells in less than 30 minutes

  HTS Compatible:Rapid, bulk transfections; able to cryopreserve transfected cells

  Robust:Reproducible & consistent processing

  Safe:Chemically defined media; sterile closed processing assemblies

  Quality:cGMP compliant, ISO-certified, CE marked

  Regulatory:Master File on record with USFDA

  1. 在完全培养液中培养特转染细胞至对数生长晚期,4℃ 640 g 离心5 min,收集细胞。

  2. 将细胞沉淀用其半量体积的预冷电穿孔缓冲液重悬洗涤,4℃ 640 g 离心5 min。

  3. 对于稳定转染,将细胞以1×107/ml的密度重悬于0℃的电穿孔缓冲液中。对于短暂表达,可用更高密度的细胞。

  4. 在冰上放置所需数量的电穿孔用的电击池,毎池中栘入0.5 ml 细胞悬液。

  5. 将DNA加入冰上各电击池的细胞悬液中。流式电穿孔转染系统握住电击池两侧的“窗口”,晃动其底部以混匀细胞悬液,在冰上放置5 min。

  6. 流式细胞转染系统将电击池放入电穿孔装置的架上用所设定的电压及电容值电击一次或多次。

  7. 将电击池置于冰上10 min。

  8. 用非选择性完全培养液20倍稀释被转染的细胞,并用该液洗电击池以移出所有的被转染细胞。

  9. 对于稳定转染,在非选择培养液中培养细胞48h (大约2代),然后转入含有抗生素的 培养液中。

  10. 对于短暂表达,培养细胞50~60 h 后,收集细胞进行短暂表达分析。

  流式细胞转染系统介绍:流式电穿孔转染系统能实现高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求广泛应用于基因和小分子等转染材料在不同细胞的转染实验中。

  MaxCyte公司为您提供MaxCyte STX 和 MaxCyte VLX 两套流式电穿孔转染系统,流式细胞转染系统能够以静态转染或者具有独家专利技术的流式电穿孔技术帮您实现高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,转染通量高达5E5 to 2E11个细胞,广泛应用于DNA, RNA, 小分子等转染材料在原代细胞、细胞系、干细胞、昆虫细胞等不同细胞的转染实验中,北京流式细胞转染系统操作简单、实验结果重复性高,并且符合现行药品生产管理规范(cGMP)标准,通过了国际标准化组织(ISO)认证,欧洲安全(CE)认证。

  流式细胞转染系统特点:

  1.能够以静态转染;

  2.具有独家专利的流式电穿孔技术;

  3. 可以实现高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求;

  4.系统操作简单;

  5. 实验结果重复性高;

  流式细胞转染系统实验领域:

  1. 原代细胞;

  2. 细胞系;

  3. 干细胞;

  4. 昆虫细胞;

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  • www.bio5.cn

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